晶欣 重組人纖粘連蛋白片段GX100B 轉(zhuǎn)染  產(chǎn)品貨號(hào)：GX100B 

產(chǎn)品組分：重組人纖粘連蛋白 2.5mg，該試劑以1 mg/ml 溶液形式提供。【含有12.5 mM檸檬酸鈉(pH 6.2)和1.25%蔗糖的無菌溶液。】

儲(chǔ)存條件：-20℃

注意：（1）最多可凍融10次。

          （2）不要?jiǎng)×一旌先芤骸２灰獪u旋。

產(chǎn)品介紹：

該重組人纖維連接片段（rFN-CH-296），由三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成：細(xì)胞結(jié)合域 、肝磷脂結(jié)合域和CS1位點(diǎn)。該片段通過協(xié)助靶細(xì)胞和病毒粒子的共定位來增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。其作用原理是：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體與肝磷脂結(jié)合域結(jié)合，細(xì)胞表面VLA-5及 VLA-4分別與該纖連蛋白的細(xì)胞結(jié)合域 和 CS-1位點(diǎn)結(jié)合。

在經(jīng)重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)容器表面，細(xì)胞與病毒載體高濃度共存，從而提高基因感染效率。

感染方案：

1.逆轉(zhuǎn)錄病毒與該重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)板結(jié)合，去除逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液后加入靶細(xì)胞。但去除上清液會(huì)減少抑制性分子(例如，從生產(chǎn)細(xì)胞分泌的分子，如蛋白聚糖、病毒包膜蛋白)，從而降低病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。

2.細(xì)胞與病毒上清液混合并結(jié)合到重組人纖粘連蛋白片段包被的培養(yǎng)板上。

兩種方案均可用于有效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。盡管方案1廣泛適用，但具體實(shí)驗(yàn)方案可能仍需根據(jù)靶細(xì)胞、載體、靶基因進(jìn)行修改。

需要準(zhǔn)備設(shè)備：

未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿

電動(dòng)移液器

移液器

無菌移液器

帶濾芯的無菌吸頭

生物安全柜或超凈工作站

顯微鏡

二氧化碳培養(yǎng)箱

孔板離心機(jī)

試劑：

無菌PBS(-)

 HBSS/Hepes (Hank's Balanced Salt溶液，添加2.5% (v/v)1 M Hepes)

 2%牛血清白蛋白(BSA Fraction V) /PBS 溶液

晶欣 重組人纖粘連蛋白片段GX100B 轉(zhuǎn)染  產(chǎn)品貨號(hào)：GX100B 

實(shí)驗(yàn)方案：

1. 重組人纖粘連蛋白片段包被培養(yǎng)板的制備

將重組人纖粘連蛋白片段包被于培養(yǎng)板上，濃度20-100μg/ml的重組人纖粘連蛋白片段可達(dá)到4-20μg/cm²的包被密度。

（1）包被前，用無菌PBS將該溶液稀釋至20-100μg/ml。【請(qǐng)?zhí)崆坝?jì)算重組人纖粘連蛋白試劑的用量，如：2.25ml濃度為20μg/ml的重組人纖粘連蛋白溶液放入直徑為35mm的培養(yǎng)皿（9cm²）中時(shí)，用于包被的密度為5μg/cm²】

注意：為避免重組人纖粘連蛋白片段丟失，請(qǐng)勿將PBS稀釋的重組人纖粘連蛋白溶液過濾除菌。

（2）將適當(dāng)體積（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml。）的無菌重組人纖粘連蛋白溶液分配到每個(gè)板中，讓板在室溫下靜置2小時(shí)或在4℃過夜。

注意:在此步驟中應(yīng)使用未經(jīng)處理的細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)組織培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿。

（3）移除重組人纖粘連蛋白溶液，然后用適量含無菌2%牛血清白蛋白(BSA，Fraction V)的PBS溶液進(jìn)行封閉（24孔板中每孔0.5 ml，或6孔板每孔2 ml），讓板在室溫下靜置30分鐘。

（4）移除BSA溶液，用適當(dāng)體積的HBSS/Hepes或PBS清洗一次。除去洗滌液后，即可使用。重組人纖粘連蛋白片段包被板可用封板膜密封，并在4℃下儲(chǔ)存—周。

2.基因轉(zhuǎn)導(dǎo)

使用重組人纖粘連蛋白試劑進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法有兩種:重組人纖粘連蛋白結(jié)合病毒感染法(A方法)和上清液感染法(B方法)。在A方法中，逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒首先結(jié)合到涂有重組人纖粘連蛋白試劑的板上，去除病毒上清液后加入靶細(xì)胞。在B方法中，將病毒溶液和靶細(xì)胞混合，然后添加到重組人纖粘連蛋白片段包被板中。

如果病毒溶液未經(jīng)純化直接用于病毒感染，可能會(huì)因?yàn)槲廴?/span>導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率降低。在這種情況下，推薦使用A方法，通過將病毒與重組人纖粘連蛋白試劑結(jié)合并去除上清液來去除抑制物。

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